透析已成為生化實驗室簡便、常用的分離純化技術(shù)之一。透析的主要作用是消炎殺菌、深層清洗、深層排毒,有利于皮膚吸收。生物大分子生產(chǎn)過程中,除鹽、去除少量有機溶劑、去除生物大分子雜質(zhì)、濃縮樣品等都要采用透析技術(shù)。透析袋通常是半透膜制成的袋狀容器。
透析袋的選擇
1、選擇合適的截留分子量。
截留分子量的選擇基于膜內(nèi)預(yù)約的大分子的分子量和去除的小分子污染物的分子量。為了達到合理有效的分離,需要分離的兩種物質(zhì)的分子量比例至少為25。選擇陷阱分子量經(jīng)驗法則:為了得到至少90%的保持率,選擇陷阱分子量的值約為所保持的高分子分子量的一半。分子量差超過100倍時,可以同時確保高收率和高純度。
分子量差為10倍時,為了追求高收率,可以選擇低截留分子量;為了追求高純度,可以選擇高截留分子量。例如,在產(chǎn)品(CytC,20KD)和雜質(zhì)(vitB12,2kd)的情況下,將重點放在收率上,選擇分級分子是提高產(chǎn)品分子量的80%-100%以及收率,用分級分子量20KD的膜進行CytC和vitb12以純度為重點,但以收率為代價,選擇分級分子量高的膜,樣品的保持率為50%-80%左右,用分級分子量為50KD的膜分離CytC和VitB12,達到收率76%左右和約2%的B12的殘留。
對于分離幾個分子的應(yīng)用,分子間的分子量差至少要5倍才能完成有效的膜透析。如果不能滿足分子量差異要求,可能需要使用其他分離技術(shù),如色譜法和切向流過濾。
2、選擇合適的扁平寬度(體積)
滲透袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。小透析管透析更快;大的透析管由于擴散距離長,透析慢。為了方便使用,建議使用全長(包括封閉夾和頂部空間)約10-15cm的透明包。
3、選擇合適的透析膜材質(zhì)
各個膜的親和性因分子而異。對球蛋白,相對結(jié)合親和性由低到高CE<;RC<;PVDF。
